Vol. 20 JA2016 - thoracic

T-14 – Study of the effect of alveolar microparticles on alveolar epithelial cells type II during lung ischemia reperfusion

Sophie Guinard, Anne Olland, Jérémie Reeb, Mélanie Burban, Fatiha Zobairi, Ferhat Meziani, Pierre-Emmanuel Falcoz, Valérie Schini-Kerth, Laurence Kessler, Florence Toti, Gilbert Massard Institution : Service de chirurgie thoracique, nouvel hôpital civil, Strasbourg Objectives : In vitro study of paracrine effect of alveolar microparticles (MPs) generated during lung ischemia reperfusion, on alveolar epithelial cells (AEC) type II. Methods : The bronchoalveolar lavage (BAL) of rat lungs is collected after 20h of cold ischemia and 2h of reperfusion. MPs are isolated, concentrated and their cellular origin determined after capture on annexin-5 or on specific antibodies. Washed and concentrated MPs are applied, during 20 hours on rat AEC type II (RLE-6TN) at 70% of confluence. Cellular integration of MPs is evaluated after labeling with a fluorescent probe PKH26. Induced apoptosis is assessed by the percentage of cells carrying hypodiploide DNA, the cellular function by the presence of surfactant protein B and inflammation by the rate of interleukin 8 (IL8). Results : The yield of MPs gathered in BAL is 80% after 2h of ultracentrifugation. The microparticles are endothelial and leukocyte origin. More than 90% of MPs are integrated in cells after 24h of stimulation. The percentage of apoptosis induced by alvolar MPs at concentrations of 5, 10, 15 nMPhSer is 3±1.4%, 3±0.9%, 4.4±2.2% respectively, vs 3.4±1.4% for untreated cells and 9.9±4.5% for cells sitmulated by 0.1 µg/ml of actinomycin. Stimulation by alveolar MPs at concentrations of 10 and 15 nMPhSer significantly increase the concentration of SpB in cell supernatant compared to untreated cells (p<0.001). We have not highlighted IL8 in cell surpernatant after stimulation by MPs. Conclusion : Alveolar microparticles are integrated in alveolar epithelial cell type II and have a cell activator effect by the stimulation of the production of lung surfactant.
novembre 29, 2016
Vol. 20 JA2016 - thoracique

T-14 – Étude du rôle des microparticules alvéolaires sur les cellules alvéolaires épithéliales de type II au cours de l’ischémie reperfusion pulmonaire

Sophie Guinard, Anne Olland, Jérémie Reeb, Mélanie Burban, Fatiha Zobairi, Ferhat Meziani, Pierre-Emmanuel Falcoz, Valérie Schini-Kerth, Laurence Kessler, Florence Toti, Gilbert Massard Institution : Service de chirurgie thoracique, nouvel hôpital civil, Strasbourg Objectif : L’étude, in vitro, du rôle paracrine des microparticules (MPs) alvéolaires produites au cours de l’ischémie reperfusion pulmonaire, sur des cellules alvéolaires épithéliales (CAE) de type II. Méthode : Le liquide broncho-alvéolaire est recueilli lors de la reperfusion pulmonaire ex vivo, pendant 2 heures, de blocs bipulmonaires de rats soumis à 20 heures d’ischémie froide. Les MPs sont isolées, quantifiées et leur origine cellulaire déterminée après capture sur annexine-5 ou anticorps spécifiques. Les MPs lavées et concentrées sont appliquées pendant 20 heures à des CAE de type II de rat (RLE-6TN) à 70 % de confluence. L’intégration cellulaire des MPs est évaluée après marquage par une sonde fluorescente PKH26. L’apoptose induite est estimée par le pourcentage de cellules portant de l’ADN hypodiploïde, la fonction cellulaire par la présence de protéine B du surfactant et l’intensité de l’inflammation par le taux d’interleukine 8 (IL8). Résultat : Le rendement d’isolement des MPs alvéolaires est de 80 % après 2h d’ultracentrifugation. Les MPs sont d’origine endothéliale et leucocytaire. Plus de 90 % des MPs sont intégrées dans les cellules après 24 heures de stimulation. Le pourcentage d’apoptose induit par les MPs alvéolaires aux concentrations de 5, 10, 15 nMPhSer est respectivement de 3 ± 1,4 %, 3 ± 0,9 %, 4,4 ± 2,2 %, vs 3,4 ± 1,4 % dans les cellules non traitées et 9,9 ± 4,5 % pour les cellules soumises à 0,1 µg/ml d’actinomycine. La stimulation par les MPs alvéolaires aux concentrations de 10 et 15 nMPhSer augmente significativement la concentration en SpB dans le surnageant cellulaire (p < 0,001). Nous n’avons pas mis en évidence IL8 dans le surnageant cellulaire après stimulation par les MPs alvéolaires. Conclusion : Les MPs alvéolaires sont intégrées dans les cellules alvéolaires épithéliales de type II et ont un rôle d’activateur cellulaire par stimulation de la production de surfactant.
novembre 29, 2016